Определение альдегидных групп фотоколориметрическим методом по Саболксу

Метод основан на восстановлении альдегидными группами хлорида 2,3,5-трифенилтетразолия с образованием красного красителя формазана, который определяют фотоколориметрически.

Этот метод дает достаточно точные и хорошо воспроизводимые результаты и позволяет определять очень малые количества альдегидных групп.

Методика анализа. Навеску абсолютно сухой измельченной целлюлозы массой 0,01 г помещают в пробирку и заливают 0,5 см3 раствора гидроксида калия концентрацией 0,2 моль/дм3 и 0,5 см3 0,2%-ного водного раствора хлорида 2,3,5-трифенилтетразолия. Пробирку опускают на 10 мин в кипящую водяную баню. Затем пробирку с окрашенной целлюлозой быстро охлаждают под струей холодной воды. Массу из пробирки переносят на стеклянный пористый фильтр и отфильтровывают, применяя отсос, в мерную пробирку на 10 см3. Массу на стеклянном фильтре промывают без отсоса небольшими порциями этанола до тех пор, пока образовавшийся в ходе реакции краситель не перейдет полностью в раствор и объем жидкости в отсосной пробирке не достигнет 10 см3. Для улучшения растворения красителя массу на фильтре перемешивают стеклянной палочкой.

Интенсивность окраски полученного раствора определяют на спектрофотометре при длине волны 546 нм или на фотоэлектрическом колориметре с зеленым светофильтром в кювете толщиной 10 мм. Параллельно проводят контрольное определение без образца целлюлозы. Контрольную пробу, которая должна быть бесцветной, используют в качестве раствора сравнения.

Следует отметить, что образовавшийся краситель формазан нестоек, и поэтому все операции необходимо выполнять быстро.

Содержание альдегидных групп — CHO определяют по градуировочному графику в мг и рассчитывают их массовую долю, % к абсолютно сухой целлюлозе, по формуле

где т — масса СНО-групп в навеске, определенная по градуировочному графику, мг; g — масса абсолютно сухой навески, г.

Построение градуировочного графика. Готовят точно 0,1%-ный раствор химически чистой глюкозы. В мерную пробирку вносят микропипеткой 0,05 см3 этого раствора, добавляют 0,5 см3 раствора гидроксида калия концентрацией 0,2 моль/дм3 и 0,5 см3 0,2%-ного раствора ХТТ. Смесь в пробирке нагревают 10 мин на кипящей водяной бане, охлаждают, доливают этанолом до метки, соответствующей 10 см3, и фотоколориметрируют. Найденное значение оптической плотности соответствует 0,05 мг глюкозы или 0,007775 мг СНО-групп. Строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс найденную оптическую плотность 0,1%-ного раствора глюкозы, а по оси ординат — массу СНО-групп. Полученную точку соединяют с началом системы координат.