Новая химия » Определение витамина В12 в биологических объектах » Определение В12 различными методами

Определение В12 различными методами

Страница 1

Рассмотрим возможность применения этих методов для определения цианокобаламина в биологических обьектах.

Применение физико-химических методов

· Хроматография

Цианкобаламин накапливается в клетках бактерий, поэтому операции по выделению витамина заключаются в следующем: сепарирование клеток, экстрагирование водой при рН 4,5-5,0 и температуре 85-90?С, в присутствии стабилизатора (0,25% раствор натрия нитрита), Экстракция протекает в течение часа, после чего водный раствор охлаждают, нейтрализуют раствором едкого натра, добавляют коагулянты белка - хлорид железа трехвалентного и алюминия сульфат с последующим фильтрованием. Фильтрат упаривают и дополнительно очищают, используя методы ионного обмена и хроматографии, после чего проводят кристаллизацию витамина при 3-4С из водно-ацетонового раствора.

Итак, в данном случае в качестве аналитического метода используют тонкослойную

хроматографию. Этот тип определения отличается простотой осуществления и экономией времени. Он основан на том, что растворимость биологически активных веществ весьма различна. Знание этой величины играет большую роль как при экстракции, так и при нанесении и разделении. Водорастворимые витамины на высушенном слое силикагеля значительно стабильнее жирорастворимых витаминов, что облегчает нанесение и количественное определение.

Условия разделения и результаты

При использовании смеси Генсхирта и Мальзахера на силикагеле цианкобаламин остается в точке старта (см. табл. 1), а водой перемещается (Rf * 100 е^22).

Обнаружение и возможности определения

Табл 1. Ориентировочная величина Rf x 100 и непосредственное обнаружение витамина В12 с использованием различных источников освещения на слоях силикагеля с флуоресцирующей добавкой

ВИТАМИН

Rf * 100

ОКРАСКА

ГРАНИЦЫ ОПРЕДЕЛ

Уксусная к-та-ацетон-метанол

вода

в УФ-свете

(254мм)

в УФ-свете

(365мм)

Дневной свет

В12

(циклокобаламин)

0

22

тёмная

фиолетова

красная

1-0,5-0,3

Рис. 2. Одномерная хроматограмма водорастворимых витаминов.

Разделение водой на слое силикагель + флуоресцентный индикатор (время анализа около 40 мин); снято в коротковолновом УФ-свете. 1 — 30 мг тиамина • НС1; 2 — 3 мг рибофлавина;7—10 дг цианокобаламина

Для идентификации относительно больших количеств цианкобаламина можно рассматривать подобную хроматограмму при различном освещении. При дневном свете по красной окраске можно определить еще 0,3 мг, в Уф-свете при длине волны 365 мм — 0,5 мг и при длине волны 254 мм — 1 мг в виде темных пятен на флуоресцирующем фоне. После хлорирования и опрыскивания раствором о-толидин — иодид калия (реактив № 32) можно еще обнаружить даже 0,2 мг в виде фиолетовых пятен. Для микроопределения следует также использовать биоавтографию.

Страницы: 1 2 3 4

Еще по теме:

Определение карбонильных групп с борогидридом натрия
Щелочной раствор борогидрида натрия или калия при комнатной температуре быстро и селективно восстанавливает альдегидные и кетонные группы до спиртовых групп. В этих условиях он достаточно инертен по отношению к двойным связям, эпоксидным, сложноэфирным и карбоксильным группам. Механизм реакции закл ...

Характеристика агрегатных и фазовых состояний ВМС
Полимеры в твердом состоянии могут быть аморфными и кристаллическими. При нагревании аморфного полимера наблюдают три физических состояния: стеклообразное, высокоэластичное и вязкотекучее. Эти состояния устанавливают на основании кривой термомеханического состояния. Аморфный полимер находится ниже ...

Физические свойства и нахождение в природе
Монокарбоновые кислоты ряда бензола — бесцветные кристаллические вещества с температурой плавления выше 100 °С. Кислоты с пара-положением заместителей плавятся при значительно более высоких температурах, чем их изомеры. Ароматические кислоты кипят при несколько более высоких и плавятся при значител ...

Идеи алхимии


Идеи алхимии

Алхимия - своеобразное явление культуры, особенно широко распространённое в Западной Европе в эпоху позднего средневековья. Слово «алхимия» производят от арабского алькимия, которое восходит к греческому chemeia, от cheo — лью, отливаю.

Категории

Copyright © 2018 - All Rights Reserved - www.chemitradition.ru
Copyright © 2021 - All Rights Reserved - www.chemitradition.ru