Новая химия » Определение витамина В12 в биологических объектах » Определение В12 различными методами

Определение В12 различными методами

Страница 3

Ниже приведены стандартные кривые, полученные при использовании данного метода.

Всего определение витамина было проведено в образцах крови 25-ти доноров и 250-ти больных с различными видами анемий. Средние значения витамина В12 в норме составило 700± 150 мг/мл (350-900).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ В РАСТВОРАХ

Спектрофотометрический

Растворы, содержащие в 1 мл 0,03 мг, и растворы, со-0,1; 0,2; 0,5 или 1 мг в -1 мл, предварительно водой в .отношении 1:2, 1:4, 1:10 и 1:20, помещают в кювету спектрофотометра с толщиной слоя в 1 см и определяют оптическую плотность при длине волны 361 нм.

Содержание цианокобаламина в миллиграммах в 1 мл (х) вычисляют по формуле:

X

=(

E

*10*

v

)/201

где v — разведение, 10— постоянный коэффициент, Е— найденная оптическая плотность.

Колориметрический метод

Испытуемый раствор наливают в кювету метра с толщиной слоя 1—2 см и находят величину оптической плотности раствора (зеленый светофильтр). По найденной величине, пользуясь калибровочным графиком, устанавливают содержание витамина В12 в 1 мл раствора прямым путем.

Для построения калибровочного графика берут растворы чистого кристаллического цианокобаламина, содержащие 0,02; 0,025; 0,03; 0,035; 0,04; 0,045; 0,05; 0,055; 0,065 и 0,07 мг в 1 мл и определяют оптическую плотность этих растворов.

На оси абсцисс откладывают содержание витамина B12, а на оси ординат—соответствующие плотности.

Около 0,02 г препарата (точная навеска) растворяют в воде в мерной колбе емкостью 500 мл и доводят водой до метки. Определяют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, употребляя в качестве контрольного раствора воду.

Содержание витамина В12 а процентах (х) рассчитывают по формуле:

X

=(

c

*500*100)/(207*100*

a

)

Где С – оптическая плотность раствора, а – навеска в граммах, 50 – разведение в мл, 100 – постоянный коэффициент, 100 – пересчёт в %.

Применение биологических методов Определение цианокобаламина

c

Escherichia coli в драже или таблетках

Содержание цианокобаламина определяют микробиологическим методом с Escherichia coli 113-3 в качестве тест - микроорганизма.Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, указанное в соответствующих частных статьях, количественно переносят водой в мерную колбу определенной вместимости и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют. Из полученного раствора делают разведение 1% раствором натрия цитрата с таким расчетом, чтобы концентрация раствора для анализа была близкой к контрольной концентрации раствора стандартного образца - 0,05 мкг в 1 мл.В чашки Петри (6 чашек для построения стандартной кривой и 3 чашки для раствора испытуемого препарата) одинакового диаметра с ровным и плоским дном, установленные на горизонтальном столе, отрегулированном по ватерпасу, разливают по 10-12 мл расплавленной и охлажденной до температуры 48-50 град. С основной среды, засеянной суспензией Е. coli 113-3 из расчета от 4 до 6 мл суспензии на 200 мл основной среды. После застывания среды на каждой чашке стерильным бором делают по трафарету под углом 60 град. С друг к другу 6 лунок диаметром 8 мм. В три лунки (через одну) 6 чашек, используемых для построения стандартной кривой, и 3 чашек - для раствора испытуемого препарата, вносят по 0,1 мл раствора Государственного стандартного образца контрольной концентрации (0,05 мкг/мл). В три лунки (через одну) каждых 3 чашек вносят по 0,1 мл одной из концентрации остальных растворов Государственного стандартного образца, а также раствора испытуемого препарата. Чашки выдерживают в термостате при 37 град. С от 16 до 18 ч. После этого измеряют диаметры зон стимуляции роста тест - микроорганизма для каждой концентраций растворов стандартного образца. После измерения зон роста для всех концентраций рассчитывают среднюю величину зоны, учитывая в каждом случае 3 чашки, т. е. 9 зон, затем рассчитывают среднюю величину зоны для контрольной концентрации, учитывая все чашки, т. е. 27 зон. По разности между средней величиной зоны контрольной концентрации раствора (0,05 мкг/мл), выведенной из всех чашек, и средней величиной зоны контрольной концентрации раствора Государственного стандартного образца, выведенной из 3 чашек с каждой отдельной концентрацией, находят поправку к величине зоны данной концентрации. Найденную поправку прибавляют к средней величине зоны данной концентрации, если она положительная, и вычитают, если она отрицательная. Аналогичным образом делают поправку к концентрации раствора испытуемого препарата. Содержание С63Н88СоN14О14Р (цианокобаламина) в одном драже или одной таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле: С х б х КХ = -------------, а х 1 000 000 где С - содержание цианокобаламина в 1 мл испытуемого раствора,найденное по стандартной кривой, в микрограммах; К - коэффициент разведения; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже в граммах; 1 000 000 - пересчет в граммы.

Страницы: 1 2 3 4

Еще по теме:

Поведение палладия в хлоридных средах
Хлорид палладия [3,4]. Палладий начинает взаимодействовать с хлором при сравнительно низкой температуре (~ 260° С) по реакции: Pd + Сl2 = PdCl2 + 184 кДж/моль. Полное превращение палладия в PdCl2 происходит при 525°С. При более высокой температуре наблюдается плавление, а затем испарение PdCl2. При ...

Препараты белков крови
В качестве плазмозаменителей на основе компонентов крови используют растворы альбумина, протеина, криопреципитата и гамма-глобулина. Альбумин – один из важнейших белков плазмы крови, составляющий около половины всех ее белков 1 г альбумина способен связать такое же количество жидкости, как 18 мл на ...

Основные свойства полиолефинов
Таблица 1. Основные свойства полиэтилена Свойства Единица измерения ПЭНП (ПЭВД) ПЭВП СВМПЭ ПЭНД ПЭСД Плотность кг/м3 918-935 945-955 960-970 940 Температура плавления °С 105-115 130-135 130-135 125-135 Температура размягчения °С 60-65 80-90 80-100 110-120 Мол. масса промышленных марок, ·10-4 2-5 7- ...

Идеи алхимии


Идеи алхимии

Алхимия - своеобразное явление культуры, особенно широко распространённое в Западной Европе в эпоху позднего средневековья. Слово «алхимия» производят от арабского алькимия, которое восходит к греческому chemeia, от cheo — лью, отливаю.

Категории

Copyright © 2018 - All Rights Reserved - www.chemitradition.ru
Copyright © 2022 - All Rights Reserved - www.chemitradition.ru